熒光定量PCR的分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用

 　　熒光定量PCR的分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究中的應(yīng)用
　　分子生物學(xué)研究
　　1 核酸定量分析。 對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析，病原微生物或病毒含量的檢測(cè) , 比如近期流行的甲型H1N1流感， 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi 基因失活率的檢測(cè)等。
　　2 基因表達(dá)差異分析。 比較經(jīng)過(guò)不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等 ) ，特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證
　　3 SNP 檢測(cè)。檢測(cè)單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義，因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性，一旦SNP 的序列信息是已知的，采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的 SNP 檢測(cè)將會(huì)變得簡(jiǎn)單而準(zhǔn)確。
　　4 甲基化檢測(cè)。甲基化同人類的許多疾病有關(guān)，特別是癌癥， Laird 報(bào)道了一種稱作 Methylight的技術(shù)，在擴(kuò)增之前先處理 DNA ，使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不受影響，用特異性的引物和 Taqman探針來(lái)區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA ，這種方法不僅方便而且靈敏度更高。
　　醫(yī)學(xué)研究
　　5 產(chǎn)前診斷：人們對(duì)遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無(wú)法治療，到目前為止，還只能只能通過(guò)產(chǎn)前監(jiān)測(cè)，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)其Y性別決定區(qū)基因是一種無(wú)創(chuàng)傷性的方法，易為孕婦所接受。
　　6 病原體檢測(cè)：采用熒光定量PCR檢測(cè)技術(shù)可以對(duì)淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測(cè)定。與傳統(tǒng)的檢測(cè)方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。
　　7 藥物療效考核：對(duì)乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達(dá)，干擾素治療作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定治療過(guò)程中，HBV- DNA的血清含量曾有下降，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發(fā)生變異。
　　8 腫瘤基因檢測(cè)：盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚，但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達(dá)增加和突變，在許多腫瘤早期就可以出現(xiàn)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR不但能有效地檢測(cè)到基因的突變，而且可以準(zhǔn)確檢測(cè)癌基因的表達(dá)量。目前用此方法進(jìn)行過(guò)端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因、腫瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測(cè)。